Genotipos de virus papiloma humano (VPH) en pacientes con cáncer cervico-uterino en un hospital público y una clínica privada de Santiago, Chile / Human papillomavirus (HPV) genotypes in cervix uterine cancer patients in a public hospital and private clinic from Santiago, Chile

We compared HPV genotypes among squamous cervical cancer samples from a public hospital (n = 55) and a private clinic (n = 35 cases) of Santiago. Paraffin-embedded specimens were analyzed by PCR followed by an immunoenzimatic assay. Reverse line blotting was used for the identification of 36 HPV genotypes. We found HPVDNAm 94.4 percent of all cancers. Single mfections: HPV16: 40.0 percent, (clinic 37.1 percent, hospital 41.8 percent) VPH18:7.8 percent (clinic 2.9 percent, hospital 10.9 percent); single+multiple mfections: VPH16: 61.1 percent (clinic 53.1 percent, hospital 71.7 percent), VPH18: 34.4 percent (clinic 21.9 percent, hospital 45.2 percent). HPV16 orHPV18 occurredin 75.6 percent of cases, higher inthe hospital than the clinic (87.3 percent-95 percent CI: 84.9-96.3 - and 57. l percent-95 percent CI: 46.6-66 - respectively, p = 0.002). Other genotypes in single mfections: HPV 26, 31, 33, 45, 58, 67; in co-mfections: HPV 35,52,56,59 and 66. HPV16 but specially HPV 18 were significantly more frequent in the public hospital; 75.6 percent of squamous cervical cancer were associated to the vaccine preventable HPV16/18.

Se comparan los genotipos de VPH en casos de cáncer cérvico-uterino escamocelular de una clínica privada (n: 35) y de un hospital público (n: 55) atendidos entre 1996 y 2006 en Santiago, Chile. Se analizaron por RPC y ensayo inmunoenzimático muestras tumorales en bloques de parafina, genotipificándose con reverse Une blotting para 36 genotipos de VPH. Se detectó VPH en 94,4 por ciento de los casos: infecciones únicas por: VPH 16: 40,0 por ciento>, (clínica 37,1 por ciento, hospital 41,8 por ciento) VPH 18: 7,8 por ciento (clínica 2,9 por ciento, hospital 10,9 por ciento); total de infecciones por VPH 16 61,1 por ciento (clínica 53,1 por ciento, hospital 71,7 por ciento), por VPH 18 34,4 por ciento (clínica 21,9 por ciento, hospital 45,2 por ciento). Co-infección: VPH 16/18 75,6 por ciento (clínica 57,1 por ciento; IC95 por ciento = 46,6-66,0 hospital 87,3 por ciento; IC95 por ciento = 84,9-96,3, p = 0,002). Se identificó otros 11 genotipos oncogénicos en infecciones únicas (VPH: 26, 31, 33, 45, 58, 67) o en co-infección con VPH 16/18 (VPH: 35, 52, 56, 59, 66). VPH 16 y VPH 18 fueron significativamente más frecuentes en el hospital público, particularmente VPH18; 75,6 por ciento> de los cánceres se asociaron a los genotipos VPH 16/18, tipos prevenibles por vacuna.

Evaluación de hipermetilación del gen p16INK4alfa en cáncer escamoso de pulmón en pacientes chilenos / Hypermethylation of gene p16INK4alpha in chilean patients with squamous cell lung carcinoma

The silencing of p16INK4a (p16) tumor suppressor gene by aberrant methylation has been described as a common event in human tumoral types, such as squamous cell lung carcinoma (SCLC). This is a very frequent histological type in Chile, usually associated to chronic smokers. The purpose of this study was to investigate the p16 methylation status in patients with SCLC. Using a MSP (methylation-specific PCR), we determined that 25 out of 29 (86 percent) of SCLC patients had hypermethylation of p16 gene. There was also a significant concordance between hypermethylation of p16 gene and the presence of SCLC (p = 0.00005). According to our results, smokers have a 202-fold higher risk to develop SCLC than no-smokers (odds ratio, 201,7; 95 percent confidence interval, 7.18-5593). Therefore, our results suggest that hypermethylation of p16 gene is an useful prognostic marker in chronic smokers candidates to develop SCLC and patient with clinic suspicion of SCLC.

El silenciamiento génico por metilación aberrante del gen p16INK4a (p16) ha sido descrito en varios tipos de tumores humanos, como por ejemplo, el carcinoma escamoso de pulmón (CEP), un tipo histológico frecuente en Chile, asociado a tabaquismo crónico. El propósito de este estudio fue determinar el estado de metilación de la región promotora de p16 en CEP. Utilizando un método de PCR específico para metilación, se determinó que un total de 29 pacientes con CEP, 25 (86 por ciento) tenían el gen p16 hipermetilado. Además, se encontró una correlación significativa entre la hipermetilación del gen p16 y la presencia de CEP (p = 0,00005). Por otra parte, estimamos que los individuos fumadores tienen 201,7 veces más riesgo que los no fumadores de desarrollar CEP (odds ratio, 201,7; intervalo de confianza 95 por ciento, 7,18-5.593). Nuestros resultados sugieren que la detección de hipermetilación del gen p16 podría ser utilizada como un marcador molecular de diagnóstico precoz en individuos fumadores con riesgo a desarrollar CEP y en pacientes con sospecha clínica de CEP.

Biología molecular en infectología: parte II, diagnóstico molecular de agentes infecciosos / Molecular biology in infectius diseases: part II molecular diagnosis of infectious agents

Las aplicaciones diagnósticas de la biología molecular para enfermedades infecciosas son extremadamente variadas y aplicables a cualquier problema diagnóstico. En agentes virales de la familia Hepersviridae, los más usados se basan en la amplificación del gen de la enzima ADN polimerasa que permite la detección de virus herpes simplex (VHS) 1 y 2, virus varicela-zoster (VVZ), citomegalovirus (CMV), virus de Epstein Barr (VEB) y herpesvirus humano (HVH) 6 en forma simultánea. Esta metodología ha detectado la coinfección por VHS 1 y VZV en muestras de líquido cefalorraquideo. En CMV son utilizados en el monitoreo de la reactivación de CMV en pacientes inmunosuprimidos siendo capaz de detectar reactivación viral con una semana de anticipación a la aparición de los síntomas. Los métodos moleculares han permitido la identificación del VEB en una proporción de 8 a 20 por ciento de casos de cáncer gástrico los cuales poseen una cepa única a pesar de la presencia de múltiples cepas en la población sana. Estas asociaciones entre virus y cáncer también se han descrito para el virus papiloma humano y cáncer pulmonar. En agentes bacterianos, la detección y cuantificación de Bordetella pertussis es otra aplicación relevante ya que podría convertirse en un método de diagnóstico rápido y predictivo de severidad de enfermedad en niños menores de 6 meses. La caracterización de cepas de Helicobacter pylori en relación con cáncer gástrico y enfermedadulcerosa péptica, y la caracterización de cepas nosocomiales de Staphylococcus aureus resistente a meticilina (SAMR), son ejemplos de las potencialidades de los métodos moleculares en la tipificación de microorganismos. En el diagnóstico de agentes causantes de patologías respiratorias como Mycobacterium tuberculosis, Pneumocystis carinil y agentes atipicos de infecciones respiratorias, estos métodos han permitidoel diagnóstico a partir de muestras de obtención no invasora. Finalmente, también han demostrado su aporto en el diagnóstico de infecciones micóticas (candidiasis y aspergilosis), n particular en pacientes inmunocomprometidos

Identificación de virus papiloma humano 16 en carcinoma queratinizante de pulmón / Identification of human papillomavirus 16 in keratinizing lung carcinoma

El cáncer pulmonar constituye la primera causa de muerte por cáncer en el mundo y la cuarta causa de muerte por cáncer en Chile. El carcinoma escamoso de pulmón representa entre 35 por ciento a 50 por ciento de los casos de cáncer pulmonar. Existe fuerte evidencia, aunque aun controversial, respecto de la asociación entre esta forma histológica y la infección por Virus Papiloma Humano (VPH), siendo los genotipos VPH 16 y 18 los que se han asociado a lesiones malignas y premalignas de diversos tejidos epiteliales. Analizamos casos de carcinomas escamosos de pulmón del tipo queratinizante para evaluar la presencia de genotipos de VPH 16 y 18 en Chile. Quince casos con diagnóstico histológico de carcinoma escamoso moderada y altamente diferenciados en tejido incluido en parafina, fueron tratados con xilol y etanol y resuspendidos en proteinasa K durante 48 horas a 56 C para la extracción de ADN. Este se amplificó mediante la reacción de polimerasa en cadenas (PCR) usando partidores específicos para VPH genérico, VPH 16, VPH 18 y betaglobina humana como control positivo interno. Los amplificados fueron revelados en geles de polacrilamida y tinción con nitrato de plata. Identificamos la presencia de VPH genérico en 6 (42,2 por ciento) de 13 casos amplificables. De estos casos todos correspondieron al genotipo VPH 16 y ninguno correspondió al genotipo VPH 18. La presencia de VPH 16 en la serie analizada indicaría que VPH puede tener algún rol en cáncer pulmonar del tipo escamoso - queratinizante. Es interesante la ausencia de VPH 18 en la serie analizada lo cual podría indicar características epidemiológicas propias en nuestra población. En esta serie analizada, una muestra mostró no corresponder a los genotipos estudiados. Es necesario realizar un estudio más amplio con otros genotipos de VPH y un universo mayor de casos para confirmar estos resultados

Reordenamiento de inmunoglobulinas en el diagnóstico diferencial del linfoma gástrico primario / Immunoglobulin rearrangement in the differential diagnosis of primary gastric lymphoma

Background: The traditional methods to distinguish Chronic Follicular Gastritis and Primary Gastric Lymphoma do not allow an adequate definitive diagnosis in a significant number of cases. The Molecular Biology diagnostic methods are based on the rearrangement of immunoglobulin genes. The polymerase chain reaction (PCR) specifically amplifies this rearrangement and allows molecular analysis of minimal tissue samples obtained with endoscopical biopsies. Aim: To test the usefulness of this PCR method in the differential diagnosis between Chronic Follicular Gastritis and Primary Gastric Lymphoma. Material and methods: We analyzed the endoscopical biopsies of six Chronic Follicular Gastritis cases and eight surgically treated Primary Gastric Lymphoma cases, six with the correct diagnosis in the endoscopical biopsies and two with a diagnosis of Chronic Follicular Gastritis. Results: A policlonal immunoglobulin rearrangement was found in the six cases with Chronic Follicular Gastritis. A monoclonal arrangement was found in 5 of 6 biopsies with the diagnosis of Primary Gastric Lymphoma. The same monoclonal rearrangement was observed in the two biopsies incorrectly diagnosed as Chronic Follicular Gastritis. Conclusions: PCR analysis of immunoglobulin rearrangement is a useful method in the differential diagnosis between Chronic Follicular Gastritis and Primary Gastric Lymphoma